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细菌培养常用培养基和抗生素的配制方法
阅读次数:86 发布时间:2020/6/19 10:01:33
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    一、常用培养基

1、LB培养基
将下列组分溶解在0.9L水中:
蛋白胨10g
酵母提取物5g
氯化钠10g

如果需要用1NNaOH(~1ml)调整pH至7.0,再补足水至1L。注:琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。


2、SOB培养基
将下列组分溶解在0.9L水中:
蛋白胨20g
酵母提取物5g
氯化钠0.5g
1mol/L氯化-钾2.5ml

用水补足体积到1L。分成100ml的小份,高压灭菌。培养基冷却到室温后,再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。


3、SOC培养基
成分、方法同SOB培养基的配制,只是在培养基冷却到室温后,除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外,再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖(18g葡萄糖溶于足够水中,再用水补足到100ml,用0.22um的滤膜过滤除菌)。


4、TB培养基
将下列组分溶解在0.9L水中:
蛋白胨12g
酵母提取物24g
甘油4ml

各组分溶解后高压灭菌。冷却到60℃,再加100ml灭菌的170mmol/LKH2PO4/0.72mol/LK2HPO4的溶液(2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中,使终体积为100ml。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌)。


5、2×YT培养基
将下列组分溶解在0.9L水中:
蛋白胨16g
酵母提取物10g
氯化钠4ml

如果需要用1NNaOH(~1ml)调整pH至7.0,再补足水至1L。注:琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。


6、YPD培养基
将下列组分溶解在0.9L水中:
蛋白胨20g
酵母提取物10g
葡萄糖20g

用水补足体积为1L后,高压灭菌。建议在高压灭菌之前,对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸,因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板,需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。


二、常用抗生素

氨苄青霉素(ampicillin)(100mg/ml)
溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中,*后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。


羧苄青霉素(carbenicillin)(50mg/ml)
溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中,*后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。


甲氧西林(methicillin)(100mg/ml)
溶解1g甲氧西林钠于足量的水中,*后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。


卡那霉素(kanamycin)(10mg/ml)
溶解0.1g卡那霉素于足量的水中,*后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。


氯霉素(chloramphenicol)(25mg/ml)
溶解0.25g氯霉素足量的无水乙醇中,*后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以12.5ug/ml~25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。


链霉素(streptomycin)(50mg/ml)
溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中,*后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。


萘啶酮酸(nalidixicacid)(5mg/ml)
溶解0.05g萘啶酮酸钠盐于足量的水中,*后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。


四环素(tetracyyline)(10mg/ml)
溶解0.1g四环素盐酸盐于足量的水中,或者将无碱的四环素溶于无水乙醇,定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光,于-20℃贮存。常以10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。


小技巧:如配制10mg/ml卡那霉素,先在盐水瓶或血清瓶加入10ml双蒸水,高压,冷却后加入0.1g卡那霉素,混匀,滤膜过滤到试管中,再以1ml/管分装到EP管中待用。

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